最近中文字幕日韩人妻-日本最新一区二区三区在线-午夜视频日韩在线观看-日本在线一区二区观看

技術(shù)文章 / article 您的位置:網(wǎng)站首頁 > 技術(shù)文章 > 大鼠T淋巴細(xì)胞亞群CD4+(CD4)ELISA檢測試劑盒說明書

大鼠T淋巴細(xì)胞亞群CD4+(CD4)ELISA檢測試劑盒說明書

發(fā)布時間: 2021-02-19  點擊次數(shù): 1574次

  大鼠T淋巴細(xì)胞亞群CD4+(CD4)ELISA檢測試劑盒說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被T淋巴細(xì)胞亞群CD4+(CD4)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的T淋巴細(xì)胞亞群CD4+(CD4)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

  • 酶標(biāo)儀(450nm
  • 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL2-20uL、20-200uL200-1000uL
  • 37℃恒溫箱

操作注意事項

  1.   試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
  2.   實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
  3.   預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
  4.   嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
  5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12×8

12×4

標(biāo)準(zhǔn)品(400 ng/ml

0.5mL

0.5mL

按說明書進行稀釋

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6mL

3mL

按說明書進行稀釋

樣本稀釋液

6mL

3mL

按說明書進行稀釋

檢測抗體-HRP

6mL

3mL

20×洗滌緩沖液

20mL

20mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1

1

注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為:400200、100、50、25、0ng/ml.

試劑的準(zhǔn)備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按120稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

  1.   手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
  2.   自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔,空白孔什么都不加;標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL
  3.   待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
  4.   隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中(空白孔不加)加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體50μL,用        封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  6.   所有孔加入底物A、B50μL37℃避光孵育15min。
  7.   所有孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

 

試劑盒性能

  •  準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9200。
  •  靈敏度:可以檢測濃度小于1.0 ng/ml
  •  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
  •  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
  •  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
  •  有效期:6個月
  •  檢測范圍:6.25ng/ml -400ng/ml

免責(zé)聲明

  •   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé)。
  •   嚴(yán)格按照說明書操作,不同批號不可交換使用,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔(dān)。

聯(lián)


九色综合狠狠综合久久| 日本中文字幕免费专区| 免费看的日韩av毛片| 精品人妻一区二区四区| 黄色免费av片在线观看| 亚洲免费av第一区第二区 | 日韩av天堂在线观看| 日韩欧美亚洲一区二区| 视频在线观看亚洲午夜福利| 久久精品性少妇一区=区三区| 天堂av免费资源在线观看| 在线亚洲精品一区二区| 欧美日韩另类激情免费| 人妻中文字幕av资源| 日本一区二区三区日本| 日韩av黄色大片在线播看| 国产91九色在线播放| 久久精品国产91麻豆| 国产黄片一区二区在线| 日韩欧美在线观看一区二区| 男人天堂在线视频网站| 日韩电影中文字幕一区| 97碰碰视频在线观看| 亚洲人成网站18禁止人| 欧美日本黄色一级视频| 国产综合亚洲欧美日韩| 精品国产免费第一区二区三| 黄色三级视频一区二区三区| 麻豆久久精品国产亚洲精品超碰热 | 国产成人自拍视频网站| 日韩一二三区欧美四五区新| 亚洲综合中文字幕经典av在线 | 日本精品女优一区二区三区四区| 国产三级视频在线观看视频| 日韩av在线播放亚洲天堂| 麻豆午夜福利在线播放| 天天操夜夜骑日日干| 日韩高清在线不卡视频| 日本精品一级免费在线| 亚洲天堂福利视频网站| 韩日av一区二区三区|