發(fā)布時(shí)間： 2021-03-17 點(diǎn)擊次數(shù)： 998次
胰島素ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理是將純化的ins抗體包入微孔板中制成固相載體。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、生物素ins抗體和HRP標(biāo)記的親和元件依次加入微孔中，洗滌后用底物（TMB）顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)為藍(lán)色，在酸的作用下轉(zhuǎn)為黃色。顏色的深度與樣品中的INS呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定吸光度（值），計(jì)算樣品濃度。
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1、試劑的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
所有打開的試劑在2-8℃下保存，保質(zhì)期內(nèi)不允許過期。所有打開的試劑應(yīng)儲(chǔ)存在2-8℃。一旦微孔板的包裝打開，就需要重新密封。
2、樣品的準(zhǔn)備
將所有的試劑和所需要的板條在使用前平衡至室溫。
洗滌液：用1170ml的蒸餾水稀釋30ml濃縮的洗滌液，終得到的容積為1200ml，稀釋好的洗滌液在室溫下可穩(wěn)定存放兩個(gè)星期。
3、樣品的收集
此ELISA試劑盒可使用血清也可使用（只有肝素或檸檬酸鹽抗凝的血漿）血漿作為樣品。
不能使用明顯溶血﹑黃疸和脂血的樣品。
血清：靜脈穿刺采集全血，待其凝血，在室溫下離心分離血清。
血漿：將全血采集到含有抗凝劑的離心管，采集后立即離心分離。
4、樣品的儲(chǔ)存：
樣品蓋好蓋子后，可在實(shí)驗(yàn)前2-8℃下儲(chǔ)存5天，要更長時(shí)間儲(chǔ)存，應(yīng)在-20℃下凍存。在開始實(shí)驗(yàn)前應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品。
5、樣品的稀釋：
在初次試驗(yàn)中，如果樣品的濃度高于高標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)按照試驗(yàn)程序的規(guī)定將樣品稀釋10倍或100倍。計(jì)算濃度時(shí)，稀釋度乘以此值。
例子：
a）按1：10稀釋：10μL的血清+90μL的零標(biāo)準(zhǔn)品（充分搖勻）。
b）按1：100釋稀：10μL按a）稀釋的血清+90μL的零標(biāo)準(zhǔn)品（充分搖勻）
好了，以上便是關(guān)于胰島素ELISA試劑盒的相關(guān)內(nèi)容介紹了。
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