發(fā)布時(shí)間： 2024-12-09 點(diǎn)擊次數(shù)： 160次
1.抗原或抗體的選擇與準(zhǔn)備：需要選擇具有高特異性和親和力的抗原或抗體作為檢測(cè)目標(biāo)。這些生物分子通常來源于病原體、細(xì)胞或組織，并通過生物技術(shù)手段進(jìn)行提取和純化。
2.包被過程：將選定的抗原或抗體均勻地涂覆在微孔板（通常是聚苯乙烯材質(zhì)）的表面。這一步驟通常采用吸附或共價(jià)結(jié)合的方式，確保抗原或抗體能夠牢固地附著在微孔板上。包被后，需要對(duì)微孔板進(jìn)行充分的洗滌，以去除未結(jié)合的抗原或抗體。
3.封閉非特異性位點(diǎn)：在包被抗原之后，為了減少后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的非特異性吸附，需要在微孔板中加入封閉液（如牛血清蛋白、雞蛋白等）。這些封閉劑會(huì)占據(jù)微孔板上未被抗原或抗體占據(jù)的位點(diǎn)，從而降低假陽(yáng)性反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。
4.標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：根據(jù)需求，將一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（通常是純化的抗原）制備成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。這些標(biāo)準(zhǔn)溶液用于后續(xù)的定量分析及計(jì)算。
5.樣品處理與一抗結(jié)合：將待測(cè)樣品經(jīng)過適當(dāng)?shù)那疤幚砗?，加入到已?jīng)包被有抗原的微孔板中。樣品中的目標(biāo)物（抗原或抗體）會(huì)與微孔板上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。隨后，加入與待測(cè)目標(biāo)物相應(yīng)的一抗（通常是標(biāo)記有酶或熒光染料的抗體），使其與樣品中的目標(biāo)物發(fā)生特異性結(jié)合。
6.二抗結(jié)合與底物添加：加入與一抗相對(duì)應(yīng)的二抗（通常是與酶結(jié)合的抗動(dòng)物抗體），使其與一抗結(jié)合。這二抗可以與一抗形成復(fù)合物，進(jìn)一步增強(qiáng)目標(biāo)物的信號(hào)。然后，加入適當(dāng)?shù)牡孜铮ㄟ^酶的催化作用產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)（如顏色變化、熒光發(fā)射等）。
7.反應(yīng)停止與測(cè)量：在信號(hào)的發(fā)展達(dá)到所需程度后，加入合適的反應(yīng)停止劑，停止酶反應(yīng)，并防止繼續(xù)信號(hào)的擴(kuò)大。最后，使用相應(yīng)的測(cè)量?jī)x器（如酶標(biāo)儀、熒光分析儀等）來測(cè)量反應(yīng)產(chǎn)生的信號(hào)，并根據(jù)已知標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中目標(biāo)物的濃度或相對(duì)含量。
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