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簡述生長因子elisa試劑盒的操作流程

發(fā)布時間: 2021-03-05  點擊次數(shù): 986次
   簡述生長因子elisa試劑盒的操作流程
  生長因子elisa試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人血小板衍生生長因子(PDGF)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人血小板衍生生長因子(PDGF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
  生長因子elisa試劑盒操作流程如下:
 ?。?)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
  (2)酶標板置4℃,包被過夜。
 ?。?)洗板:吸干孔內(nèi)反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
  (4)陰性對照孔每孔加入pbs50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
 ?。?)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
 ?。?)洗板,同(4)。
  (7)每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的抗兔抗體工作液100μl。
 ?。?)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
  (9)洗板,同(4)。
 ?。?0)每孔加tmb顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
 ?。?1)每孔加100μl2mol/lh2so4終止反應。
  (12)分別測450nm吸光值w1和630nm吸光值w2,終測得的od值為兩者之差(w1-w2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
 ?。?3)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(s)和陰性對照(n)的od值后,計算s/n值。s/n***2.1為陽性判定標準。
  結(jié)果判斷:
  繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
  生長因子elisa試劑盒實驗說明:
  1、試劑盒保存:-20(較長時間不用時);2-8(頻繁使用時)。
  2、濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
  3、中、英文說明書可能會有不一致之處,請以英文說明書為準。
  4、剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。

聯(lián)


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